Санитарно-гельминтологические исследования. Методы лабораторной диагностики гельминтов
Медицинское значение имеют три группы гельминтов-нематоды (круглые черви), цестоды (ленточные черви) и трематоды (сосальщики).
Для видовой идентификации яиц гельминтов используются следующие признаки.
1. Размеры . Измеряют длину и ширину яиц, которые обычно имеют определенную у каждого вида величину.
2. Форма . Для каждого вида характерна своя особая форма яиц.
3. Стадия развития при выделении во внешнюю среду . У одних Видов яйца состоят из одной клетки; у других в яйце может быть несколько клеток; у третьих яйца обычно эмбрионированы (т.е. они содержат личинки) при выделении с фекалиями во внешнюю среду. Иногда, если пробы фекалий исследуют через несколько часов или спустя 1-2 дня после дефекации, яйца гельминтов развиваются до более взрослых стадий. В идеале на анализ следует принимать только свежие пробы фекалий.
4. Толщина оболочки яйца. Яйца некоторых видов, например аскарид, имеют толстую оболочку; у других видов гельминтов, например у анкилостомид, оболочка яиц тонкая.
6. Наличие морфологических особенностей , таких, как крышки, шипы, пробки, крючочки или фестончатая наружная оболочка.
При обнаружении яйца гельминта или похожего на него объекта следует тщательно оценить все перечисленные выше признаки, чтобы установить видовой диагноз.
Для того чтобы установить видовую принадлежность яиц гельминтов, необходимо определить их размер, форму, стадию развития, толщину оболочки, цвет и наличие морфологических особенностей, таких, как крышечки, шипы, пробки, крючочки и бугристая наружная оболочка.
Для установления видового диагноза используют специальные определители и схематические изображения яиц гельминтов.
Рис. 34.2. Относительная величина, форма и структура яиц гельминтов.
1. ИССЛЕДОВАНИЕ ИСПРАЖНЕНИЙ.
Гельминтологические исследования проводятся с целью диагностики гельминтозов путем обнаружения в патологическом материале яиц, личинок, взрослых гельминтов или их фрагментов. Поскольку большинство гельминтов в половозрелой стадии развития находится в желудочно-кишечном тракте или в сообщающихся с ним органах, чаще всего применяются макро- и микрогельминтоскопические методы исследования фекалий (не более суточной давности).
С целью повышения достоверности обследования анализы должны быть повторены несколько раз ежедневно с промежутком 1-3 дня.
1.1. МАКРО ГЕЛЬМИНТОСКОПИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ИСПРАЖНЕНИЙ
Метод отстаивания . Суточную порцию фекалий тщательно промывают водой, пока вода над осадком не станет прозрачной. Слив верхний слой, переносят осадок в чашку Петри и на темном фоне просматривают его под лупой или невооруженным глазом.
Метод отсеивания. Перемешанные с водой фекалии помещают на систему сит специального прибора. После промывания водопроводной водой сита переворачивают и, смыв содержимое в чашки Петри, просматривают невооруженным глазом или под лупой.
1.2. МИКРО ГЕЛЬМИНТОСКОПИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Используют гельминтоовоскопические и гельминтоларвоскопические методы с целью обнаружения яиц гельминтов и их личинок.
1.2.1. ГЕЛЬМИНТООВОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
При использовании гельминтоовоскопических методов обнаружения гельминтов вначале готовят двоякого рода мазки – нативный и толстый .
Þ Нативный мазок. Небольшое количество фекалий растирают на предметном стекле в капле 50%-ного раствора глицерина или кипяченой воды. Крупные частицы осторожно удаляют, смесь накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом (просматривают два мазка).
Делая нативный мазок, следует знать, что при слабых инвазиях в нем редко обнаруживаются яйца гельминтов.
Þ Толстый мазок с целлофаном по Като. Метод основан на обнаружении яиц гельминтов в толстом мазке кала, просветленном глицерином и подкрашенном малахитовым зеленым. Подготовленный толстый мазок фекалий покрывают кусочком целлофана, смоченного смесью глицерин-фенол влажного целлофана. Препарат исследуют через 30–60 мин, когда он слегка подсохнет и просветлится, вследствие чего яйца гельминтов легко обнаружатся под малым увеличением микроскопа.
В большом мазке хорошо видны окрашенные крупные яйца гельминтов, несколько хуже – прозрачные яйца карликового цепня. Для обнаружения мелких яиц этот метод непригоден.
Þ Методы обогащения
Среди методов обогащения используют методы флотации (всплывания) и седиментации (осаждения).
А). Методы флотации основаны на применении насыщенных растворов различных химических веществ, в которых яйца всплывают благодаря разнице удельного веса.
Метод всплывания по Фюллеборну основан на всплывании яиц гельминтов в насыщенном растворе хлорида натрия (удельный вес 1,18), что дает возможность выявления яиц при небольшом их количестве. Метод более эффективен, чем изучение нативного мазка. Достоинствами является доступность и дешевизна. Данный метод хорошо выявляет яйца нематод и карликового цепня.
Однако яйца трематод, тениид, неоплодотворенные яйца аскарид не всплывают в данном растворе. Поэтому требуется обязательно исследовать не только поверхностную пленку, но и осадок, что усложняет метод. К недостаткам относится и замедленное всплывание яиц: яйца карликового цепня всплывают через 15-20 мин, аскарид – через 1,5-2 часа, власоглава – через 2-3 часа.
Метод Е.В.Калантарян также метод обогащения, но более эффективен и проще. Применяется насыщенный раствор нитрата натрия с относительной плотностью 1,38. Поэтому яйца большинства гельминтов всплывают и обнаруживаются в поверхностно пленке, исследование осадка не требуются.
Недостаток метода – дефицит нитрата натрия, а также то, что яйца трематод, онкосферы тениид не всплывают и остаются в осадке.
Б). Метод осаждения (седиментации) яиц гельминтов основаны на использовании химических веществ, растворяющих жиры и белки фекалий.
Метод П.П.Горячева основан на принципе осаждения яиц. Мазок в этом случае получается светлый, что облегчает обнаружение мелких яиц трематод.
Метод Горячева был предложен для обнаружения яиц описторха и оказался эффективнее, чем исследование нативного мазка и метода Фюллеборна. В настоящее время для диагностики описторхоза (клонорхоза) рекомендуются методы Като и Калантарян, как достаточно эффективные и технически более простые.
1.2.2. ГЕЛЬМИНТОЛАРВОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ (выявление личинок)
Метод закручивания по Е.С.Шульману. Метод предложен для обнаружения в кале личинок гельминтов, в первую очередь стронгилоидов . Исследуют только свежевыделенные фекалии, которые размешивают палочкой в 5-кратном количестве воды. Через 20-30 ск после начала размешивания палочку быстро вынимают, образовавшуюся на ее конце каплю жидкости переносят на предметное стекло и микроскопируют.
Метод Берманна основан на способности личинок гельминтов мигрировать по направлению к теплу и служит для их выявления в фекалиях, в первую очередь при подозрении на стронгилоидоз.
2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ДРУГИХ ЭКСКРЕТОВ И СЕКРЕТОВ
В дуоденальном содержимом микроскопируют имеющиеся в нем хлопья и плотные включения, а затем, разлив его по пробиркам, добавляют равный объем серного эфира, центрифугируют и исследуют осадок.
В рвотных массах изредка обнаруживаются гельминты или их фрагменты (например, при прорыве нагноившейся эхинококковой кисты из легкого в бронхи с рвотой выделяется светлая водянистая или гнойная жидкость). Диагноз ставится на основании обнаружения обрывков кутикулярной оболочки, сколексов и крючьев эхинококка.
Исследование мочи.
Мочеполовой шистосомоз диагностируют путем выявления яиц и мирацидиев. Яйца возбудителя мочеполового шистосомоза (Schistosoma haemotobium) крупные и достигают в длину 120-150 мкм, они имеют терминальный шип на одном конце. Внутри яйца можно увидеть зародыш (мирацидий). Иногда возникает необходимость установить, являются ли обнаруженные яйца жизнеспособными. Это можно определить, если препарат свежий и к нему не добавлялись консерванты. При хронической форме шистосомоза у больных к концу мочеиспускания выделяется кровь, но яйца в моче находят редко, вследствие чего рекомендуется прибегать к биопсии мочевого пузыря.
Яйца парагонимуса, обитающего преимущественно в легких, в случае локализации в почке, мочеточниках, стенках мочевого пузыря попадают в мочу. В хилезной моче выявляются микрофилярии.
Исследование мокроты.
В мокро те могут находиться яйца парагонимусов, шистосом, личинки мигрирующих нематод, фрагменты эхинококкового пузыря. При некоторых гельминтозах в мокроте наблюдаются характерные изменения. При парагонимозе , например, в мокроте можно обнаружить скопления яиц в виде желтоватых комочков.
Прямые методы: выявление самих гельминтов, их фрагментов, яиц, личинок в фекалиях, моче, дуоденальном секрете, мокроте, носовой и влагалищной слизи, содержимом подногтевых пространств, биопсированных кусочках ткани.
При диагностике нельзя каким-либо одним методом выявить яйца или личинки всех видов гельминтов, обитающих в пищеварительной системе человека. Так, при использовании метода флотации в поверхностную пленку не всплывают (из-за высокого удельного веса) яйца трематод, в некоторых случаях неоплодотворенные яйца аскарид. В кале очень редко можно обнаружить яйца остриц, онкосферы тениид, которые выявляются специальными методами исследований: соскоб с перианальных складок для остриц и тениид, методы осаждения для трематод (яйца описторха и др.). Поэтому для целенаправленного обследования больного на гельминтозы врач в направлении должен указать, на какие гельминты следует обратить основное внимание (диагноз), что позволит лаборанту выбрать соответствующую методику для выявления данного вида гельминта. Фекалии, взятые из разных мест испражнений в количестве не менее 50 граммов (чайная ложка) в чистую стеклянную посуду, должны быть отправлены в лабораторию не позднее чем через сутки после дефекации и исследованы в день поступления.
В случае необходимости сохранения кала до следующего дня его помещают в холодное место (0-4°С) или заливают одним из консервантов.
Перед исследованием кал перемешивают палочкой, чтобы яйца гельминтов оказались равномерно распределенными в общей массе.
При обнаружении в препарате яиц какого-либо гельминта просмотр не прекращают, т.к. может быть двойная или тройная инвазия.
Контроль за эффективностью лечения гельминтозов осуществляется путем исследования фекалий на яйца гельминтов через 2-3 недели или через 2-3 месяца после лечения в зависимости от обнаруженного гельминта.
Макроскопические методы служат для обнаружения в кале целых половозрелых гельминтов или их фрагментов невооруженным глазом или с помощью ручной лупы.
Часто на поверхности кала после дефекации можно видеть активно ползающих остриц; выделяются с калом аскариды; иногда люди сами замечают отхождение гельминтов. У больных дифиллоботриозом могут выделяться обрывки стробилы лентеца (в виде "лапши"), а у инвазированных тениидами (свиной или бычий цепень) с калом часто отходят членики гельминтов (в виде "белых обсечек") или они активно выползают из анального отверстия.
Макроскопический метод является основным для дифференциальной диагностики тениидоза и тениаринхоза (в сочетании с опросом).
Из специальных макроскопических методов применяется метод последовательного промывания фекалий.
Фекалии размешиваются в воде для получения равномерной суспензии, после чего при хорошем освещении их тщательно просматривают отдельными небольшими порциями в черных фотографических кюветах или на темном фоне в чашках Петри. Пинцетом или препаровальной иглой извлекают все подозрительные белые частицы, крупные образования, подозрительные на фрагменты гельминтов, и рассматривают их под лупой между двумя предметными стеклами. Мелких гельминтов или головки цестод рассматривают под лупой в капле глицерина или под микроскопом.
При использовании этого метода для диагностики члеников свиного, бычьего цепней, широкого лентеца отмытые членики помещают между двумя стеклами и, просматривая на свет под лупой или малым увеличением микроскопа, определяют видовую принадлежность по строению матки (у зрелого членика свиного цепня от центрального ствола отходят 8-12 боковых ответвлений, а у бычьего цепня 18-32, чаще 28-32, у широкого лентеца членики больше в ширину и матка в центре в виде "розетки"). Если матку плохо видно, то ее предварительно можно подержать некоторое время в 50% растворе глицерина, после чего даже запустевшие стволы матки просматриваются хорошо.
При определении этих цестод по строению отошедших головок их с шейкой осторожно кладут в каплю глицерина между предметными стеклами (или покрывают покровным стеклом) и, не передавливая, рассматривают под микроскопом при малом увеличении.
Микроскопические методы подразделяются на простые, сложные и специальные.
К простым относятся методы нативного мазка, нативный мазок раствором Люголя, методы толстого мазка под целлофаном по Като, закручивания (по Шульману) и перианального соскоба.
Сложные методы являются более эффективными и основаны на концентрации яиц в препаратах. Они включают в себя предварительную обработку фекалий жидкими реактивами, в результате чего яйца гельминтов или выпадают в осадок, или всплывают на поверхность жидкости.
К сложным методам относятся методы обогащения:
а) флотационные (когда удельный вес яиц меньше удельного веса солевого раствора и яйца всплывают в поверхностную пленку);
б) седиментационные (когда удльный вес яиц больше удельного веса солевых растворов и яйца оседают в осадок).
Специальными методами обнаружения яиц и личинок гельминтов, цист и вегетативных форм простейших являются методы соскоба, флотации, седиментации, ларвоскопии, протозооскопии, исследование желчи и методы окраски мазков кала, мокроты и др.
Простые методы исследования фекалий
Нативный мазок . Небольшую частицу испражнений берут деревянной палочкой из различных участков доставленной порции, хорошо растирают на предметном стекле в капле 50%-ного раствора глицерина и делают на 2-3 предметных стеклах тонкий мазок. Просматривают под микроскопом не менее 3 препаратов. Недостаток метода: просматривается малое количество материала, поэтому как самостоятельный метод не применяется.
Метод закручивания (Шульмана). 2,0-3,0 г испражнений кладут в стаканчик, тщательно размешивают стеклянной палочкой с 5-кратным объемом физиологического раствора или дистиллированной воды, производя быстрые движения в течение 2-3 мин, и быстро вынимают палочку из смеси. Каплю смеси на конце палочки переносят на предметное стекло и микроскопируют. Принцип центробежной силы вызывает скопление яиц и личинок на палочке.
Метод толстого мазка по Като с целлофаном . Химические реактивы:100%-ный глицерин, 6%-ный раствор фенола (100 мл воды + 6 г фенола), 3%-ный раствор малахитовой зелени (2,5 мл дистиллированной воды + 75 мл малахитовой зелени).
Приготовление рабочего раствора: 100 мл 6%-ного раствора фенола + 100 мл чистого глицерина + 1,2 мл 3%-ного раствора малахитовой зелени.
Приготовление целлофановых полосок: нарезаются полоски из целлофана, размер которых соответствует предметному стеклу. Целлофан должен быть гидрофильный (пригоден целлофан, который горит; если плавится, то непригоден). В рабочем растворе можно обработать до 5 тыс. полосок. Срок экспозиции целлофановых полосок до готовности к употреблению в рабочем растворе не менее 24 час.
Ход исследования. На предметное стекло наносят 50 мг фекалий (с крупную горошину), растирают индивидуальной палочкой (стеклянной, деревянной), накрывают целлофановой полоской и сверху притирают резиновой пробкой до получения равномерного толстого мазка. Препарат высушивают при комнатной температуре в течение часа или в термостате при 40°С в течение 20-30 мин и микроскопируют (время выдержки можно увеличить при комнатной температуре до 5-6 час и более).
По эффективности данный метод приближается к методу флотации, но выявляет инвазию интенсивную и средней интенсивности.
Применяется как самостоятельный метод диагностики и рекомендуется для массового обследования населения.
В клинико-диагностических лабораториях применяется как унифицированный метод диагностики гельминтов при отсутствии в направлениях врачей конкретных диагнозов.
Методы перианального соскоба и нативного мазка с раствором Люголя описаны в разделе специальных методов.
Сложные методы обогащения фекалий
В основу методов обогащения положена разность удельного веса яиц гельминтов и применяемого солевого раствора.
При применении метода флотации могут быть использованы следующие солевые растворы:
1. Раствор нитрата свинца PbNO3 (азотнокислого свинца) с плотностью 1,5. Готовится из расчета 650 г вещества на 1 л воды. Соль растворяют порциями в горячей воде в эмалированной посуде, подогревая на плите и постоянно помешивая до полного растворения. Фильтровать раствор не обязательно. Раствор готовят в день исследования, так как со временем он дает осадок, и плотность его начинает падать уже через 24 ч. Если раствор приготовлен в большом количестве, то в последующие дни перед исследованием его подогревают, размешивая осадок. Приготовление раствора производится в вытяжном шкафу, так как нитрат свинца – соль тяжелого металла.
2. Раствор нитрата аммония NH4NO3 (гранулированной или обычной аммиачной селитры) с плотностью 1,3 готовят так же, как и предыдущий, но из расчета 1500 г вещества на 1 л горячей воды.
3.Раствор нитрата натрия NaNO3 или азотнокислого натрия с плотностью 1,38-1,4 готовят из расчета 1000 г вещества на 1 литр горячей воды.
4. Раствор тиосульфата натрия Na2S2O3×5H2O (гипосульфита натрия) с плотностью 1,4 готовят из расчета 1750 г вещества на 1 л горячей воды.
5. Раствор сульфата натрия Na2SO4 (английской соли) с плотностью 1,26-1,28 готовят из расчета 920 г вещества на 1 л горячей воды.
6. Раствор хлорида цинка ZnCl2 (хлористого цинка) с плотностью 1,82 готовят из расчета 2000 г вещества на 1 л горячей воды. Остывший раствор не кристаллизуется.
7. Насыщенный раствор хлорида натрия NaCl (поваренная соль) с плотностью 1,18-1,2. На! л воды добавляют 400-420 г соли порциями в эмалированное ведро с кипящей водой, постоянно размешивая до полного растворения. При остывании раствора выпадают кристаллы хлорида натрия.
Удельный вес флотационных растворов измеряется аэрометром только после полного остывания раствора при комнатной температуре.
Методы флотации наиболее эффективны для обнаружения яиц карликового цепня, власоглава, анкилостомид, аскарид, широкого лентеца.
Поверхностную пленку можно снимать с помощью проволочной петли или предметного стекла.
В насыщенном растворе поваренной соли пленку можно исследовать через 30-40 мин, в растворе аммиачной селитры – через 10-20-30 мин после отстаивания.
При снятии пленки проволочной петлей исследуют не менее 8 капель.
Предметные стекла снимают с пленки больше яиц, чем проволочные петли. Стекло должно соприкасаться с жидкостью флотационного раствора, которую добавляют в стаканчик пипеткой. После отстаивания стекло снимают, кладут смоченной поверхностью вверх на стекло большего размера и исследуют под микроскопом. Предметные стекла перед использованием обязательно обезжиривают.
Для проведения исследований необходимо иметь: предметные стекла, химические стаканчики, проволочные петли, кюветы, чашки Петри, пипетки, груши, стеклянные или деревянные палочки.
Ход исследования. 5 г фекалий заливают 10-кратным количеством флотационного раствора (лучше удельным весом 1,38-1,40), тщательно размешивают, снимают сверху не растворяющиеся крупные частицы и оставляют взвесь на 10-15 мин. Затем пленку снимают либо петлей на предметное стекло, либо предметным стеклом. Для разведения испражнений лучше взять стаканчики емкостью 30-50 мл, налить раствор вровень с краями (или недоливать 2-3 мм) и смесь покрыть предметным стеклом, а затем пипеткой добавить флотационный раствор до его соприкосновения с предметным стеклом. Через 10-20 мин стекло быстро снять и оставшуюся на нем пленку микроскопировать без покровного стекла.
Методы осаждения-седиментации
Методы седиментации применяются для выявления в кале яиц геогельминтов, биогельминтов и как специальные методы исследования на описторхоз.
Метод Горячева-Золотухина (упрощенный метод Горячева). Около 1,5 г кала размешивают в химическом стаканчике в 3-4 мл воды. Полученную взвесь фильтруют через два слоя марли в центрифужную пробирку, наслаивая осторожно сверху на имеющиеся в ней 4-5 мл насыщенного раствора поваренной соли. Пробирки ставят в штатив на 15-20 ч. За это время тяжелые яйца трематод оседают. Получают два четко разграниченных слоя. Осадок микроскопируют.
Эфир-формалиновый метод. Применяется для диагностики всех кишечных инвазий и как специальный метод на простейшие и яйца описторхов.
Оборудование: центрифуга на 3000 об/мин; центрифужные градуированные пробирки, воронки; металлическое ситечко (чайное) или двухслойный бинт; предметные и покровные стекла; деревянные (или стеклянные) палочки; вата, бинт.
Химреактивы: 10%-ный раствор формалина (1 часть раствора формалина аптечного и 4 части дистиллированной воды); этиловый эфир (медицинский).
В центрифужные пробирки наливают 7 мл 10%-ного раствора формалина и помещают 1 г фекалий (такое количество фекалий, чтобы раствор в пробирке поднялся до 8 мл). Фекалии смешивают с формалином до образования однородной смеси, а затем через металлическое ситечко (или двухслойную марлю, бинт) переливают в другую центрифужную пробирку (если на ситечке остались фекалии, то ситечко надо ополоснуть формалином). Добавить 2 мл эфира в эту центрифужную пробирку, закрыть пробкой и энергично встряхивать в течение 30 сек.
Смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение одной минуты (можно в течение двух минут при 1500 об/мин). За счет реакции эфир-формалина происходит коагуляция белков в виде пробки вверху пробирки, а в осадок выпадают яйца гельминтов. Слой коагулянта убирают, сливается надосадочная жидкость, осадок наносится на предметное стекло прямо из пробирки или пастеровской пипеткой, накрывается покровным стеклом и просматривается под микроскопом.
Метод эфир-уксусного осаждения . Принцип эфир-уксусного осаждения яиц гельминтов заключается в последовательной обработке проб фекалий 10%-ным водным раствором уксусной кислоты и эфиром. Уксусная кислота лучше других химических соединений эмульгирует пробу фекалий. Она проникает в непереваренные частицы, состоящие преимущественно из клетчатки, которые при большом содержании мешают исследованиям, выпадая в осадок после центрифугирования. Последующее добавление в пробирку эфира и перемешивание приводит к извлечению из содержимого пробирки уксусной кислоты вместе с пропитанными ею каловыми частицами. Так как удельный вес смеси эфира с уксусной кислотой меньше удельного веса воды, пробы кала, обработанные этими веществами, всплывают, а яйца гельминтов, обладающие большим удельным весом, оседают.
Количество осадка, полученного после эфир-уксусного осаждения, в 3-4 раза меньше, чем после эфир-формалинового. Это значительно облегчает обнаружение в нем яиц гельминтов и позволяет исследовать осадок целиком при навеске в 0,5-1 г. Токсичность эфир-уксусного метода в 5 раз ниже.
Ход исследования. В градуированную центрифужную пробирку наливают 7 мл 10%-ного раствора уксусной кислоты и вносят навеску кала 1 г (т.е. такое количество кала, при котором раствор уксусной кислоты поднимается до 8 мл). Тщательно размешивают стеклянной или деревянной палочкой. Процеживают через воронку с двумя слоями марли в другую центрифужную пробирку. К эмульгату добавляют 2 мл этилового эфира (т.е. до 10 мл). Пробирки закрывают резиновой пробкой (можно от пенициллинового флакона) и встряхивают 15 сек. Убрав пробку, пробирки центрифугируют в течение одной минуты при 3000 об/мин в течение 2 мин. Надосадочную жидкость из пробирки сливают. В некоторых случаях образовавшаяся каловая пробка мешает сливу надосадочной жидкости. В этом случае стеклянной или деревянной палочкой отделяют пробку от стенок пробирки. Осадок пипеткой целиком переносят на предметное стекло и микроскопируют под покровным стеклом при малом увеличении. Осадок, как правило, небольшой, бесцветный. Яйца гельминтов, особенно мелкие яйца трематод, хорошо обнаруживаются.
Химико-седиментационный метод . Принцип исследования основывается на осаждении яиц из пробы фекалий в солевом растворе с удельным весом 1,15. Сущность метода заключается в непосредственном центрифугировании пробирки, в которой на раствор азотнокислого натрия (уд. вес 1,16) наслоена пробка кала, эмульгированная в 1%-ном растворе уксусной кислоты. Высокий удельный вес солевого раствора и выделяемые за счет химической реакции пузырьки, пронизывающие слой гомогенизированного кала, препятствуют его осаждению. Яйца гельминтов выпадают в осадок с небольшим количеством клетчатки. Осадок можно очистить от оставшегося детрита, обработав его 10%-ным раствором уксусной кислоты и эфиром. В этом случае остаются только одни яйца гельминтов, что значительно облегчает их выявление.
Ход исследования. В градуированную центрифужную пробирку наливают 6 мл раствора азотнокислого натрия с удельным весом 1,15. В другую пробирку наливают 7 мл 1%-ного раствора уксусной кислоты. Вносят пробу фекалий (до метки 7,5 мл при пробе 0,5 г и до 8 мл при пробе в 1,0 г). Тщательно перемешивают пробу стеклянной палочкой. Процеживают через воронку с одним слоем марли, наслаивая на раствор азотнокислого натрия. Пробирку с наслоенным фильтратом центрифугируют при 1500-2000 об/мин в течение 5 мин. Быстрым переворачиванием пробирки сливают надосадочную жидкость. В пробирку с осадком добавляют 3-4 мл 10%-ного раствора уксусной кислоты и 0,5 мл эфира, закрывают резиновой пробкой и встряхивают. Проводят повторное центрифугирование в течение 1 мин. Сливают надосадочную жидкость. Осадок переносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и микроскопируют.
ГЕЛЬМИНТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ЖЕЛЧИ, ДУОДЕНАЛЬНОГО СОДЕРЖИМОГО, МОКРОТЫ, КРОВИ, МОЧИ И МЫШЦ
Обнаружение яиц и личинок гельминтов в дуоденальном содержимом и желчи. Исследование желчи и дуоденального содержимого производится при подозрении на гельминтозы печени и желчного пузыря (описторхоз, клонорхоз, дикроцелиоз) и двенадцатиперстной кишки (стронгилоидоз).
Ход исследования. Дуоденальное содержимое и желчь (порции А, В, С) получают обычным путем при помощи зондирования. Для порции В рекомендуется обязательно получать рефлекс желчного пузыря введением через зонд 33% раствора сернокислой магнезии. Из исследуемой жидкости выбирают и просматривают под микроскопом плавающие в ней хлопья, а затем смешивают ее с равным количеством серного эфира. Смесь тщательно взбалтывают и центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают, а весь осадок исследуют под микроскопом.
При отсутствии гноя и слизи желчь и дуоденальное содержимое центрифугируют, не смешивая с эфиром.
Исследование мокроты. В гельминтологической практике исследование мокроты проводится с целью лабораторной диагностики парагонимоза. Иногда при этом выявляются яйца шистосом, личинки аскариды, элементы эхинококкового пузыря.
Из мокроты готовят нативный мазок на предметном стекле, который исследуют под микроскопом.
При обильном содержании в мокроте гноя ее смешивают с 0,5% раствором едкого натра или едкого калия, встряхивают в течение 5 минут и центрифугируют. Осадок микроскопируют.
Исследование крови. Кровь исследуют при подозрении на наличие у больного филяриозов.
В связи с тем, что при некоторых видах филяриозов (лоаоз, вухерериоз, вызванный субпериодическим штаммом) личинки (микрофилярии) бывают в периферической крови только днем, а при некоторых (бругиоз, вухерериоз, вызванный периодическим штаммом) – только ночью, соответственно в это время берут кровь для анализа.
Техника забора крови, приготовления препаратов (тонкий мазок и толстая капля), их окрашивания (по Романовскому) и исследование аналогичны таковым при лабораторной диагностике малярии.
Микрофилярии разных видов отличают по длине, ширине, изгибу тела, наличию или отсутствию чехлика, форме хвостового конца, расположению ядерной субстанции в теле и хвостовом отделе личинок.
Ход исследования. Мочу отстаивают не менее 30 мин, затем верхний слой сливают, оставляя 10-15 мл осадка, которые разливают в центрифужные пробирки, и центрифугируют в течение 1-2 мин. Слив надосадочную жидкость, осадок переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом.
ИССЛЕДОВАНИЕ БИОПТАТОВ МЫШЦ
Метод трихинеллоскопии . Необходимость в исследовании биоптатов мышц больного возникает при подозрении на трихинеллез.
Биопсия проводится по общим правилам. Обычно делают биопсию дельтовидной мышцы. При паталогоанатомическом исследовании можно делать биопсию мышц диафрагмы, пищевода, языка, жевательных и межреберных мышц, сгибателей конечностей, мышц глазного яблока, так как они наиболее интенсивно поражаются личинками трихинелл.
В лаборатории биопсированный кусочек мышц разрезают на очень мелкие кусочки (микротомом), которые помещают между двумя стеклами, раздавливая мышечные волокна, и исследуют под микроскопом. В настоящее время для этой цели широко используются специальные микроскопы – трихинеллоскопы.
В случае трихинеллеза при трихинеллоскопии по ходу мышечных волокон обнаруживаются резко выделяющиеся овальной формы (похожие на лимон) трихинеллезные капсулы. Средняя величина капсул у человека составляет 0,4 х 0,26 мм. В капсуле, как правило, содержится одна спирально свернутая в 2,5 оборота трихинелла. При высокой интенсивности инвазии в одной капсуле может быть 2 или 3 личинки. Смежные с капсулой мышечные волокна теряют свою поперечную исчерченность и принимают гомогенный вид.
Таким же способом исследуют мясо или мясные продукты, явившиеся причиной заражения.
Метод переваривания мышц . Метод более эффективен.
Ход исследования. Исследуемые мышцы мелко измельчают и заливают искусственным желудочным соком в соотношении 1:15-20. Полученную смесь помещают в термостат при 37°С на 12-16 ч. По истечении этого срока микроскопируют осадок, в котором среди массы остатков переваренных мышечных волокон обнаруживаются личинки трихинелл в свободном состоянии.
Искусственный желудочный сок можно приобрести в аптеке или приготовить в лаборатории. Для этого к 1 л дистиллированной воды добавляют 10 мл концентрированной хлористоводородной кислоты; перед использованием к 1 л разведенной кислоты добавляют 30 г пепсина.
КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Количественные методы исследования применяются при определении интенсивности инвазии, оценке эффективности различных антигельминтных препаратов, определении качества дегельминтизации, контроле проводимых массовых лечебно-профилактических мероприятий и др.
Количественное определение яиц гельминтов проводится двумя методами: методом Столла и методом Красильникова и Волковой (1974).
Метод Столла . Для проведения исследования необходимо иметь микроскоп, стеклянную колбу с отметкой 56 и 60 мл, мерный цилиндр, стеклянные бусы, резиновую пробку для колбы, градуированные пипетки, предметные стекла и 0,4% раствор едкого натра.
Ход исследования. В колбу мерным цилиндром наливают децинормальный раствор едкого натра (примерно 0,4% концентрации) до метки 56 мл и добавляют испражнения до тех пор, пока уровень жидкости не достигнет отметки 60 мл (т.е. 4 мл испражнений). Смесь тщательно взбалтывают со стеклянными бусами в течение 1 минуты, закрыв сосуд резиновой пробкой (можно перемешать и палочкой). Тотчас после взбалтывания набирают градуированной пипеткой 0,075 мл смеси (в ней содержится 0,005 мл испражнений), переносят на предметное стекло и подсчитывают количество яиц в препарате под микроскопом. Чтобы определить количество яиц в 1 г испражнений, обнаруженное число умножают на 200.
Сравнение числа яиц в препарате, обнаруженное у больного до проведения лечения и после него позволяет судить об эффективности дегельминтизации.
Метод Столла прост, дает сравнимые результаты при всех гельминтозах, возбудители которых систематически выделяют яйца в кишечник больного. Однако недостатком метода является его относительно низкая чувствительность, особенно при слабой интенсивности инвазии.
Метод Красильникова-Волковой . При исследовании этим методом не менее 1 г фекалий смешивают в стеклянной колбочке или большой пробирке с 1% раствором "Лотоса" (или 1,5% раствором "Экстры") в соотношении 1:10. Взвесь тщательно взбалтывают до образования гомогенной суспензии, затем быстро набирают градуированной пипеткой 0,1 мл взвеси (что равняется 0,01 г фекалий) и переносят на предметное стекло. Препарат покрывают покровным стеклом или целлофановой пластинкой (20 х 30 мм), выдержанной не менее одних суток в 50% водном растворе глицерина.
Подсчитывают число яиц во всем препарате. Для расчета количества яиц в 1 г фекалий полученное число надо умножить на 100.
Этот метод имеет ряд преимуществ перед методом Столла. Во-первых, он более чувствителен и позволяет выявлять гельминтов при слабой степени инвазии. Во-вторых, он очень удобен при массовых обследованиях, так как растворы детергентов, являясь консервантами яиц гельминтов, позволяют проводить исследования и не совсем свежего материала. Однако обязательным условием при этом является сбор фекалий непосредственно в раствор детергента.
Для количественного исследования можно применять любой из описанных унифицированных качественных методов, основанных на принципе всплывания яиц. Но в этом случае для анализа должно быть взято одно и то же количество фекалий, один и тот же объем флотационного раствора. Расчет степени инвазии можно произвести, зная количество яиц в 1 г фекалий, по приведенной таблице.
Интенсивность инвазии в зависимости от числа яиц гельминтов
в 1 г фекалий
СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ
Эти методы, основанные на выявлении специфических антител в сыворотке крови, применяются с диагностической и скрининговой целями.
К серологическим методам относятся:
Реакция кольцепреципитации (РКП) (трихинеллез, цистицеркоз);
Реакция кольцепреципитации в пробирках на холоде (трихинеллез, цистицеркоз);
Реакция микропреципитации на живых личинках (трихинеллез, аскаридоз);
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) (трихинеллез, эхинококкоз, альвеококкоз, цистицеркоз и др.);
Реакция агглютинации латекса (РАЛ) (эхинококкоз, альвеококкоз, трихинеллез, тениаринхоз и др.);
Реакция связывания комплемента (РСК) (трихинеллез, эхинококкоз, цистицеркоз);
Реакция энзим-меченных антител (РЭМА) (эхинококкоз, онхоцеркоз, шистосомозы, трихинеллез, токсокароз);
Иммуноферментный анализ (ИФА) (трихинеллез, описторхоз, токсокароз, токсоплазмоз и др.).
Для постановки серологических реакций выпускаются стандартные антигены или же они готовятся самостоятельно (например, из эхинококковых пузырей овец), выпускаются специальные тест-системы для ИФА.
Специальные методы исследования на энтеробиоз, тениаринхоз, тениоз
Соскоб с перианальных складок . Для получения соскоба с перианальных складок можно применять деревянный шпатель, целлофановую полоску, целлюлозную бумагу или ленту, глазные палочки со специальным клеевым слоем:
а) соскоб деревянным шпателем (шпатель – уплощенная спичка или палочка), смоченным 1% раствором глицерина (или 0,5% раствором питьевой соды), производится легким соскабливанием с поверхности перианальных складок по всей окружности анального отверстия. Полученный соскоб переносят краем покровного стекла с конца шпателя на предметное стекло в каплю 50% раствора глицерина, накрывают этим же покровным стеклом и микроскопируют. Недостатком метода является недостаточная выявляемость яиц и раздражающее действие;
б) по методу Торгушина делают смыв ватным тампоном на деревянном или другом шпателе, смоченном 50% раствором глицерина, и готовят мазок на предметном стекле в капле глицерина;
в) по методу Кеворковой в центрифужную пробирку наливают около 5 мл кипяченой воды, помещают в него шпатель (палочку) с ватным тампоном. Перед взятием материала тампон слегка отжимают о внутреннюю стенку пробирки, обтирают им перианальные складки и вкладывают шпатель с тампоном в пробирку. Тщательно взбалтывают тампон в пробирке, смыв центрифугируют 3 мин и полученный осадок исследуют под микроскопом;
г) соскоб липкой лентой по Грэхэм. Часть липкой ленты (прозрачная полиэтиленовая лента с липким слоем для детского творчества, но лучше использовать операционную пленку ЛПО-1, ЛПО-2) длиной 8-10 см приклеивают липким слоем к перианальным складкам кожи, держа за концы, а затем переносят ее на предметное стекло липким слоем вниз (концы ленты, выходящие за края стекла отрезают), стекла нумеруются, а в журнале записываются данные больного и номер стекла. В лаборатории ленту с одного конца отклеивают на большом протяжении, капают под нее 1-2 капли вазелинового масла или глицерина (для устранения оптических дефектов) и микроскопируют;
д) соскоб с помощью стеклянных глазных палочек, поверхность которых покрыта специльным клеевым составом. Глазные палочки устанавливаются в специальный штатив. Забор материала производится путем соприкосновения плоской части лопаточки к коже перианального отверстия. Затем палочка снова укрепляется в штатив для транспортировки. Микроскопия проводится непосредственно на лопаточке с обеих сторон (без предметных и покровных стекол) с предварительным креплением в кассеты при малом увеличении (окуляр х 10, объектив х 8). По окончании работы палочки дезинфицируются кипячением в мыльном растворе, а штатив и кассеты обрабатываются спиртом и промываются мыльно-содовым раствором. Состав клея: клеол – 10 г, касторовое масло – 2,5 г, этиловый эфир – 5 г, этиловый спирт 96% - 2,5 г.
Лопаточки обмакиваются в раствор клея, затем высушиваются на воздухе при комнатной температуре. Образовавшаяся на поверхности клейкая пленка сохраняется в течение нескольких дней.
Метод удобен при массовом обследовании детского населения на энтеробиоз и взрослого населения на тениидозы.
Дополнительно к методу соскоба при тениаринхозе и тениозе применяются также метод опроса и описанный выше макроскопический метод (при выявлении члеников).
Специальные методы исследования на стронгилоидоз
Применяют эфир-уксусный метод для обнаружения яиц (см. выше) и метод Бермана для обнаружения личинок в испражнениях.
Метод Бермана . Исследуют свежий кал, лучше после принятия слабительного. Пробу фекалий 5 г помещают на металлическое сито (сетку внутри выстилают двумя слоями марли) в стеклянную воронку, закрепленную в штативе. На нижний конец воронки надевают резиновую трубку с зажимом (аппарат Бермана).
Сетку с испражнениями приподнимают и в воронку наливают нагретую до 40-50°С воду таким образом, чтобы нижняя часть сетки была погружена в воду и кал покрылся водой целиком. Через 2-4 ч зажим на резиновой трубке быстро открывают, и жидкость спускается в центрифужную пробирку. После центрифугирования (1-2 мин) верхнюю часть жидкости быстро сливают, а осадок в количестве 1 мл наносят тонким слоем на предметное стекло и микроскопируют под малым увеличением микроскопа.
Метод ИМП и ТМ . В химический стаканчик помещают порцию фекалий величиной с орех, заливают теплым 40°С физраствором, чтобы фекалии покрылись раствором, оставляют на 20 мин. Через 20 мин сливают жидкость в чашку Петри и просматривают под бинокулярным микроскопом МБС.
Для диагностики стронгилоидоза, особенно для контроля за эффективностью лечения, рекомендуется сочетать метод Бермана с исследованием дуоденального содержимого.
Специальные методы исследования на нематодозы
Нематозы
Аскаридоз
В анамнезе обращается внимание на отношение к огородничеству, садоводству. Употребление в пищу сырых овощей, салатов, приготовленных из этих овощей.
Клинические проявления ранней фазы аскаридоза обусловлены аллергическими перестройками организма. Ранняя или миграционная личиночная стадия аскаридоза протекает нередко при наличии лихорадки с температурой тела до 38° и выше, с симптомокомплексом поражения легких, наличием выраженной эозинофилии крови. В большинстве случаев у детей первыми признаками заболевания являются недомогание, слабость, периодические головные боли, потливость, иногда боли в мышцах, суставах. Нередко появляется обильная сыпь типа крапивницы с сильным или умеренным зудом. Диагноз ранней фазы подтверждается рентгенологическими исследованиями на наличие в легких летучих эозинофильных инфильтратов Леффлера. В мазках свежевыделенной мокроты нередко обнаруживаются эозинофильные клетки, эритроциты, кристаллы Шарко-Лейдена и личинки аскарид.
При кишечной имагинальной стадии аскаридоза отмечается сочетание проявлений со стороны желудочно-кишечного и астенического синдромов, энтероколитический болевой симптомы. У детей нередко отмечается снижение в весе, порой довольно значительно. Тошнота, повышенная саливация, раздражительность, задержка психомоторного развития, снижение интеллекта.
Для лабораторной диагностики кишечной ст
Прежде чем проводить лечебно-профилактические мероприятия при определенных гельминтозах сельскохозяйственных и промысловых животных, необходимо своевременно поставить точный диагноз болезни. Существуют две группы методов диагностики гельминтозов - прижизненные и посмертные. Кроме того, надо уметь дифференцировать гельминтозы и другие инвазионные, а также инфекционные заболевания.
Прижизненная диагностика гельминтозов
Диагноз на гельминтозы при жизни животных ставят на основании результатов лабораторных методов исследований и диагностических дегельминтизаций (прямых методов), а также иммунобиологических реакций (косвенных методов). Подсобную роль в диагностике гельминтозов играют данные исследований промежуточных хозяев (при биогельминтозах), клинические и эпизоотологические наблюдения. Основные методы диагностики - лабораторные исследования, позволяющие часто обнаруживать возбудителей гельминтозов или их яйца и личинки в экскретах (фекалиях, моче, мокроте), секретах (желчи), тканях (крови, мышцах), органах (кусочках кожи), в содержимом пунктатов и абсцессов.
Лабораторные методы диагностики гельминтозов животных легко выполнимы и достаточно точны, поэтому их широко применяют в производственных условиях (в ветеринарных лабораториях и в других ветеринарных учреждениях). В зависимости от целевого назначения лабораторные исслелования подразделяют на гельминтоовоскопические, гельминтоларвоскопические и гельминтоскопические методы исследований.
Гельминтоларвоскопические методы исследований используют для обнаружения личинок гельминтов (диктиокаул, мюллерий и др.). Из этой группы нередко применяют исследование фекалий по методам Бермана-Орлова и Вайда.
Гельминтоскопические или макрогельминтоскопические исследования применяют с диагностической целью для обнаружения выделяемых наружу гельминтов или их фрагментов (члеников нестод). В практических условиях этим способом устанавливают диагноз на аскаридоз свиней, дрепанидотениоз гусей и другие гельминтозы.
Из лабораторных методов диагностики гельминтозов животных большое практическое значение имеют: а) гельминтокопрологические исследования (исследование фекалий); б) исследование выделений других органов; в) исследование тканей.
Гельминтокопрологические исследования
Для этих же целей предложен специальный прибор, состоящий из стальных браншей, переходных ветвей и двух прикрепленных к ветвям полусферических поверхностей. Взятие фекалий из прямой кишки животных при помощи этого прибора облегчает труд ветеринарных работников и повышает производственную культуру этой манипуляции.
У кроликов фекалии в количестве нескольких шариков извлекают путем надавливания на брюшную стенку в области прямой кишки. Иногда допускается взятие проб фекалий с пола, если они свежие и известно, от какого животного. От одного животного берут не менее 10-20 г фекалий. От птиц, пушных зверей, собак, кошек и диких хищников (в зоопарках) фекалии собирают с чистого пола клеток (групповые пробы).
Все пробы фекалий этикетируют: по краю пакета или листа бумаги (где он не будет соприкасаться с экскрементами) простым карандашом пишут номер пробы (иногда и кличку коров). К пробам фекалий прилагают опись, в которой указывают наименование хозяйства, бригады, вид, пол и возраст животных (для взрослых - кличку или инвентарный номер) и дату взятия проб. В сопроводительной желательно указать цель исследований фекалий (например, для контроля проведенной дегельминтизации). Необходимо стараться быстрее доставить пробы фекалий в ветеринарную лабораторию и исследовать их без задержки, потому что при комнатной температуре через 16-20 часов из яиц кишечных стронгилят выходят личинки, что затрудняет диагностику диктиокаулеза и протостронгилидозов, а также других гельминтозов.
Если пробы фекалий в день взятия не исследуют, то их помещают в холодильник или подвал при температуре не выше 10°. Дезинфицирующие средства не приостанавливают развитие личинок внутри яиц гельминтов. Результаты исследования фекалий регистрируют в специальном журнале.
Оборудование для гельминтокопрологических исследований. Достоверность гельминтокопрологических исследований в значительной степени зависит от качества лабораторного оборудования. В 1968 г. на Украине разработан набор стандартного оборудования для массового исследования фекалий на гельмннтозы. Он состоит из предметов, изготовленных преимущественно из ударопрочного полистерола двух цветов, которые легко моются и обезвреживаются (выдерживают кипячение), а также удобны при транспортировке. В состав набора входят стаканчики различной емкости, воронки, конические пробирки, ситечки разных размеров, штатив с пятью планками (каждая на шесть воронок), кювет (по размерам штатива), коробки для хранения посуды, а также резиновые груши, стеклянные палочки и металлические петли (рис. 1).
В отличие от ранее применявшегося разнородного оборудования новый набор повышает эффективность лабораторных исследований фекалий и производительность труда ветеринарных работников, позволяет шире проводить количественные гельминтокопрологические исследования стандартизированными методами (контроль дегельминтизаций), а также улучшает эстетическую сторону этой работы.
Различают качественные и количественные методы исследований фекалий.
Качественные гельминтокопрологические исследования
Качественные методы исследований позволяют установить, какими гельминтами заражены животные.
Гельминтоовоскопические методы. Для прижизненной диагностики гельминтозов предложено большое количество методов гельминтоовоскопии, из которых рассмотрим только те, которыми чаще пользуются в ветеринарной практике.
Большинство гельминтокопрологических методов диагностики основано на разнице удельного веса яиц, личинок гельминтов или их фрагментов, с одной стороны, и жидкости, в которой взвешены исследуемые фекалии, - с другой. В зависимоти от соотношения удельного веса этих компонентов различают методы флотации, осаждения и комбинированные.
Методы флотации. При методах флотации (всплывания) используют жидкости (насыщенные растворы солей), удельный вес которых больше веса яиц гельминтов. В лабораторной практике наиболее широко применяют насыщенный раствор поваренной соли (удельный вес 1,18). Для приготовления такого раствора в кастрюлю с кипящей водой постепенно добавляют при помешивании хлорид натрия до образования на дне небольшого осадка (на 1 л воды берут около 400 г поваренной соли). Горячий раствор фильтруют в бутыль через несколько слоев марли или вату и применяют после остывания (на дне бутыли должен образоваться кристаллический осадок).
Реже в ветеринарных лабораториях используют насыщенные растворы сульфата магния с удельным весом 1,35 (920 г на 1 л горячей воды), гипосульфита натрия с удельным весом от 1,37 до 1,41, в зависимости от температуры окружающей среды (1750 г на 1 л горячей воды) и азотнокислого натрия с удельным весом 1,4 (соотношение селитры и горячей воды 1:1).
Метод Фюллеборна характеризуется простотой выполнения и высокой эффективностью при большинстве нематодозов и цестодозов животных, поэтому он занимает первое место среди других, гельминтокопрологических методов диагностики. В стеклянный, полистероловый или пластмассовый стаканчик емкостью 50-100 мл помещают 3-5 г фекалий и при помешивании стеклянной палочкой постепенно добавляют насыщенный раствор поваренной соли (хлорида натрия) из расчета на одну часть фекалий 15-20 частей флотационной жидкости. Плотные фекалии овец предварительно можно растереть с небольшим количеством раствора соли в фарфоровой ступке, после чего суспензию переливают в стаканчик, добавив необходимое количество раствора хлорида натрия. Всплывшие крупные частицы сразу удаляют палочкой, а взвесь фекалий целесообразно профильтровать в другой стаканчик через сито (иногда употребляют молочные ситечки). После отстаивания заряженной пробы в течение 45-60 минут металлической петлей снимают три капли поверхностной пленки, помещают их на предметное стекло и микроскопируют без покровного стекла. После каждой пробы петли промывают в стакане с водой (вместо рекомендуемых в некоторых руководствах прожиганий их на спиртовке).
Метод Калантарян - видоизмененный метод Фюллеборна. В качестве флотационной жидкости используют насыщенный раствор азотнокислого натрия. Время отстаивания взвеси 15-30 минут. Применяют для диагностики и акантоцефалезов.
Методы осаждения. При методах осаждения используют жидкости с меньшим удельным весом, чем удельный вес яиц.
Метод последовательного промывания. Небольшое количество фекалий (5 г) размешивают в стаканчике с 10-кратным количеством воды. Смесь фильтруют в большой стакан и доливают воду, после чего фильтрат отстаивают 5 минут. Затем сливают или отсасывают спринцовкой верхний слой жидкости до осадка; к осадку добавляют такое же количество воды, перемешивают и отстаивают снова 5 минут. Эти манипуляции повторяют до просветления верхнего слоя жидкости в стакане. Жидкость последний раз сливают, а осадок наносят на стекло или в бактериологическую чашку и исследуют под микроскопом. Этот метод часто применяют для диагностики большинства трематодозов и акантоцефалезов.
Метод Горшкова основан на принципе осаждения с последующей концентрацией яиц гельминтов. 150-300 г фекалий лошади помещают на металлическое сито или марлю в большую стеклянную воронку диаметром в верхней части 15-20 см. На нижний конец воронки надевают резиновую трубку длиной 10-15 см с зажимом на конце. Фекалии разрыхляют и заливают доверху теплой водой. Фекалии в воронке выдерживают от 4 часов до одних суток, после чего зажим осторожно открывают, часть жидкости выпускают в центрифужные пробирки и центрифугируют 3 минуты. Затем жидкость сливают, а осадок исследуют под микроскопом. Этим методом диагностируют драшейоз и габронематоз лошадей.
Комбинированные методы. Основаны на принципе осаждения и флотации яиц гельминтов, поэтому более эффективны в сравнении с предыдущими методами исследований. Ввиду сложности эти методы имеют сравнительно ограниченное применение в производственных условиях.
Метод Дарлинга. Небольшое количество фекалий (3-5 г) размешивают в стаканчике с 20-30 мл воды, смесь процеживают в центрифужные пробирки и центрифугируют 1-2 минуты, после чего верхний слой жидкости сливают, а к осадку доливают смесь равных частей глицерина и поваренной соли. Смесь в пробирках взбалтывают и вторично центрифугируют. Всплывшие на поверхность яйца снимают вместе с пленкой взвеси проволочной петлей, стряхивают на предметное стекло и микроскопируют. При отсутствии глицерина фекалии можно смешивать перед вторичным центрифугированием с насыщенным раствором поваренной соли.
Метод Щербовича. Техника исследования фекалий напоминает предыдущий метод. Отличается от него тем, что перед вторичным центрифугированием к осадку добавляют насыщенный раствор гипосульфита натрия (при макраканторинхозе свиней) или сернокислой магнезии (). По сравнению с методом Дарлинга этот метод более эффективен.
Флотационно-седиментационный метод Демидова рекомендуют для диагностики фасциолеза, а также других трематодозов жвачных. Пробу фекалий (3 г от овец и 5 г от крупного рогатого скота) помещают в стакан емкостью 200 мл и наливают в него доверху насыщенный раствор поваренной соли и тщательно размешивают стеклянной палочкой, после чего взвесь отстаивают 15-20 минут. Всплывшие на поверхность грубые частицы удаляют бумажным совочком, а надосадочную жидкость отсасывают спринцовкой (при исследовании большого количества проб жидкость можно сливать), оставляя на дне 20-30 мл осадка. К осадку доливают воду до полного объема стакана и тщательно размешивают. Смесь фильтруют в обычный стакан через марлю или металлическое сито и отстаивают 5 минут. Надосадочную жидкость отсасывают, оставляя на дне 15-20 мл осадка, который переносят в конический стаканчик, пропаласкивают обычный стакан и выливают смыв в маленький. Взвесь отстаивают в коническом стаканчике 3-5 минут, а жидкость в последующем отсасывают (эту процедуру повторяют). Просветленный осадок переносят на предметное стекло и микроскопируют. Этот метод эффективнее метода последовательного промывания.
Гельминтоларвоскопические методы. Метод Бермана-Орлова. Для исследования фекалий используют аппарат, состоящий из средней воронки (пластмассовой, полистероловой или стеклянной), резиновой трубки (10-15 см длиной), соединенной верхним концом с воронкой, зажима, укрепленного на нижнем конце резиновой трубки, металлического сита или куска марли и штатива (для одного или нескольких аппаратов). Смонтированный аппарат заполняют теплой водой (35-38°). 10-15 г свежих фекалий кладут на сито или завертывают в марлю и осторожно опускают в воронку. Фекалии от овец выдерживают в аппарате 2-4 часа, а от телят - не менее 6-7 часов. Затем зажим на трубке ослабляют, а вытекающую жидкость собирают в пробирку и центрифугируют в течение 2-3 минут. После этого верхний слой жидкости сливают быстрым опрокидыванием пробирки, а оставшуюся на дне жидкость переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом. Применение зажимов на резиновую трубку в аппарате Бермана связано с неудобствами, поэтому во многих ветеринарных лабораториях нижние концы резиновых трубок непосредственно соединяют с маленькими пробирками. Перед исследованием осадка под микроскопом жидкость не центрифугируют.
Фекалии жвачных можно исследовать на легочные нематодозы (особенно в экспедиционных условиях) упрощенным методом гельминтоларвоскопии (без использования воронок). Для этой цели применяют небольшие полуконические стаканчики (50 мл). Пробы фекалий помещают на ситечки или завертывают в марлю и опускают в стаканчики с водой. Через несколько часов фекалии удаляют, жидкость из стаканчика отсасывают или сливают, а осадок микроскопируют.
Метод Вайда. Несколько шариков фекалий от мелких жвачных помещают в бактериологическую чашку или на часовое стекло и овлажняют их небольшим количеством теплой воды. Через 10-20 минут фекалии удаляют, а оставшуюся жидкость исследуют под малым увеличением микроскопа. Эффективность этого метода значительно ниже в сравнении с предыдущим методом, поэтому его реже применяют для диагностики диктиокаулеза и протостронгилидозов овец.
Метод дифференциальной диагностики стронгилятозов по инвазионным личинкам. Возбудители большинства кишечных стронгилятозов имеют почти одинаковое строение яиц, поэтому при гельминтоовоскопии можно поставить только групповой диагноз (например, стронгилятозы).
Для установления более точного диагноза (родового) в ветлабораториях иногда получают культуру инвазионных личинок стронгилят. Около 5 г фекалий помещают в бактериологическую чашку, закрывают крышкой и ставят ее в термостат при температуре 25-30° на одну неделю. Затем фекалии с личинками исследуют по методу Бермана-Орлова (для выделения инвазионных личинок из фекалий).
Инвазионные личинки разных родов кишечных стронгилят отличаются по величине тела, строению хвостового конца чехлика и по количеству кишечных клеток. Например, личинки эзофагостом более крупные (до 1 мм длины), нитевидный хвостовой конец чехлика длинный, а кишечник имеет 20-32 клетки; личинки гемонхов средней длины (около 0,8 мм), с нитевидным хвостовым концом чехлика, кишечник имеет 16 клеток.
Периодическое промывание и отстаивание фекалий повторяют до просветления верхнего слоя. Верхний слой жидкости последний раз сливают, а осадок малыми порциями просматривают в кюветках с черным и белым дном. Обнаруженных гельминтов собирают при помощи пинцетов, препаровальных игл и кисточек, просматривают под микроскопом, после чего переносят в консервирующую жидкость. Чтобы выявить мелких нематод, осадок дополнительно исследуют по частям при помощи бинокулярной или штативной лупы с 10-20-кратным увеличением.
Количественные гельминтокопрологические исследования
Стандартизированный метод Фюллеборна менее точен в сравнении с методом Столла, но в виду простоты выполнения его широко применяют в ветеринарной практике для контроля эффективности дегельминтизаций животных. По технике выполнения стандартизированный метод напоминает другие методы качественных гельминтоовоскопических исследований. Однако у него имеется ряд особенностей, основными из которых являются следующие: 1) навески фекалий должны быть равными; 2) посуда одного обьема; 3) время отстаивания водных взвесей фекалий одно и то же; 4) петли одинакового диаметра, исследование равного количества капель.
Для ориентировочного учета интенсивности диктиокаулезной и прогостронгилидозной инвазии у жвачных можно применить стандартизированный метод Бермана-Орлова. Достоверность результатов повышается при увеличение количества и кратности исследований.
Исследование выделений других органов
Исследование содержимого конъюнктивальных полостей применяют для диагностики телязиоза крупного рогатого скота (возбудитель - Thelazia rhodesi). Из спринцовки орошают конъюнктивальные полости водным раствором йода; вытекающую жидкость собирают в кюветку или почковидный тазик и осматривают на наличие телязий. В данном случае водный раствор йода оказывает и лечебное действие.
Исследование истечений из клоаки проводят для прижизненной диагностики . Вытекающую слизь помещают на предметное стекло и исследуют под микроскопом с целью обнаружений яиц возбудителя болезни.
Исследование соскоба с перианальных складок - основной метод диагностики . Лопатковидной палочкой или спичкой, смоченной смесью равных частей глицерина и воды, делают соскоб с перианальных складок промежности и внутренней поверхности корня хвоста. Соскоб переносят на предметное стекло в каплю глицерина с водой, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. Обнаружение яиц оксиур подтверждает клинический диагноз.
Исследование соскобов кожи из «летних язв» рекомендуется для диагностики кожной формы драшейоза и габронематоза. Соскоб берут со свежеизъязвленной поверхности кожи и помещают в каплю разведенной соляной кислоты (1:1000). Затем препарат расщепляют препаровальными иглами, накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом для обнаружения личинок драшей или габронем.
Исследование тканей
Исследование кожи крупного рогатого скота (по Гнединой) применяют для диагностики онхоцеркоза. На нижней брюшной стенке у животного после подготовки операционного поля вырезают небольшой кусочек кожи толщиной 2 мм (с небольшое овсяное зерно), а ранку смазывают настойкой йода. В ветеринарной лаборатории этот кусочек кожи помещают на предметное стекло в физиологический раствор, расщепляют препаровальными иголками, а затем все сливают в центрифужную пробирку и ставят ее на несколько часов в термостат при температуре 37-38°. Затем волокна кожи удаляют, жидкость центрифугируют, а осадок микроскопируют с целью обнаружения подвижных микроонхоцерков.
Исследование кусочков мышц на часто проводят посмертно. Иногда для прижизненной диагностики трихинеллеза используют метод биопсии. Путем оперативного вмешательства вырезают кусочек мышцы (например, из наружных мышц уха), из которых готовят мелкие срезы (с овсяное зерно). Последние помещают на нижнее стекло компрессория, покрывают верхним стеклом и сближают их винтами до полного расплющивания. Просматривают срезы под трихинеллоскопом, малым увеличением микроскопа, с помощью проекционного трихинеллоскопа или проекционной камеры КТ-3.
Диагностические дегельминтизации
Для диагностической дегельминтизации отбирают несколько животных, изолируют от остального поголовья и задают им антгельминтик в терапевтической дозе. Выделенные в течение одних-двух суток фекалии от этих животных собирают и подвергают гельминтоскопическому исследованию на предмет обнаружения возбудителя болезни. В производственных условиях диагностические дегельминтизации нередко проводят для прижизненной диагностики мониезиоза жвачных, дрепанидотениоза гусей, цестодозов плотоядных, аскаридоза свиней и аскаридиоза кур.
Иммунологические реакции
Аллергические кожные реакции предложены для прижизненной диагностики фасциолеза овец, описторхоза плотоядных, и , мониезиоза овец, гемонхоза и диктиокаулеза овец, онхоцеркоза крупного рогатого скота и лошадей и трихинеллеза свиней.
Из серологических методов следует указать на реакцию сколексопреципитации, позволяющую диагностировать ранние стадии эхинококкоза и реакцию преципитации с использованием живых личинок аскарид и трихинелл для выявления соответствующих гельминтозов.
Исследование промежуточных хозяев гельминтов
Результаты гельминтологического обследования животных всегда должны дополняться данными исследований на гельминтозы промежуточных хозяев. Они позволяют выяснять гельминтологическую ситуацию, прогнозировать появление гельминтозов. Промежуточными хозяевами гельминтов могут быть моллюски (пресноводные и сухопутные), ракообразные (циклопы, дафнии, бокоплавы, водяные ослики), дождевые черви, насекомые (мухи, мошки, мокрецы, стрекозы, муравьи, жуки), почвенные клеши.
Эпизоотологическое значение имеет плотность (количественный состав) отдельных видов промежуточных хозяев. Чем она выше, тем больше имеется возможностей для заряжения животных гельминтозями. Наземные промежуточные хозяева находятся в разных местах (в навозных кучах, на выгулах, пастбищных участках и др.). Водные промежуточные хозяева в огромном количестве обитают у берегов стоячих мелких водоемов, в зарослях растений. В этих местах животные (особенно ) часто заражаются гельминтозами.
Промежуточных хозяев на наличие личинок гельминтов надо исследовать в свежем (лучше живом) состоянии под бинокулярной лупой или малым увеличением микроскопа. Личиночные стадии гельминтов в теле промежуточных хозяев находятся на разных стадиях развития, но наиболее заметными являются инвазионные личинки. В итоге исследований определяется экстенсивность (процент) и интенсивность (количество) инвазированности промежуточных хозяев личинками определенных видов гельминтов.
Орибатидные или панцирные, клещи (до 1 мм длины). Обитают в верхних слоях почвы. Это промежуточные хозяева мониезий жвачных и других гельминтов. Для обнаружения личинок ленточных червей (цистицерроидов) предварительно в капле воды на предметном стекле (под контролем лупы) расщепляют на части панцирь орибатидного клеща, затем препарат покрывают покровным стеклом и микроскопируют. Цистицеркоиды мониезий округлой формы (0,15-0,19 мм в диаметре), снабжены четырьмя присосками и хвостовым придатком. Они очень нежные, поэтому не следует применять метод компрессорного исследования клещей.
Дождевые черви других родов (Criodrilus, Eophila) обитают в водоемах с топкими, илистыми берегами. Они зарегистрированы в качестве промежуточных хозяев возбудителей гистрихоза и порроцекоза уток. Личинка гистрихиса очень крупная (до 3 см длины), беловатого цвета, просвечивает сквозь кожные покровы червя в виде волнистой полосы. Личинки порроцекумов в десять раз меньше предыдущей личинки (2,5-3 мм); они обнаруживаются в кровеносных сосудах при компрессорном исследовании дождевых червей под микроскопом.
Исследование бокоплавов. Бокоплавы достигают длины до 2 см, обитают в морских и пресноводных водоемах. Зарегистрированы они в качестве промежуточных хозяев возбудителей полиморфоза. стрептокароза и тетрамероза птиц. Личинок обнаруживают при компрессорном исследовании этих рачков. Личинки (акантеллы) полиморфуса овальной формы, оранжевого цвета, до 1 мм длины, заметны макроскопически.
Исследование водяных осликов. Водяные ослики от 1 до 1,5 см длины, живут в пресноводных водоемах, являются промежуточными хозяевами возбудителя филиколлеза птиц. При компрессорном исследовании можно выявить личинку (акантеллу) белого цвета, овальной формы, 0,7 мм длины.
Можно также исследовать и других промежуточных хозяев (мошек, мокрецов, мух, стрекоз, жуков, муравьев).
Люминесцентная микроскопия
Метод люминесцентной микроскопии (по В. Г. Эврановой) - новый метод диагностики гельминтозов. Он позволяет дифференцировать однотипные яйца разных видов гельминтов, а также отличать жизнеспособные яйца и личинки от мертвых. Предварительно яйца трематод, цестод и нематод обрабатывают растворами акридина оранжевого и другими флуорохромами. Жизнеспособные яйна и личинки нематод не люминесцируют или слабо люминесцируют, в то время как мертвые ярко светятся и окрашены в оранжевый, желто-зеленый или желтый цвет.
При люминесцентной микроскопии можно дифференцировать яйца главнейших цестод плотоядных, яйца возбудителей и гетеракидоза кур, имеющих, как известно, сходное строение по величине, форме и окраске, а также различать жизнеспособные и мертвые ооцисты кокцидий.
Препараты просматривают под микроскопом МУФ-3 или МЛ-2. Методика люминесцентной микроскопии сравнительно проста и может быть использована в производственных условиях (ветеринарных лабораториях).
Из других исследований, имеющих подсобное значение в установлении диагноза на гельминтозы. можно указать на такие, как выяснение морфологического состава крови (учет эозинофилии), метод определения фракции белков.
Краткая характеристика яиц гельминтов
Яйца представителей разных классов различаются по величине, цвету, форме, строению оболочек и внутреннего содержимого.
Яйца трематод. Чаще овальной формы с крышечкой на одном полюсе. Оболочка гладкая. У некоторых видов оболочка снабжена филаментами (отростками), бугорками. Окраска яиц от светло-серой до коричневой (чаще желтая).
Яйца цестод. Бывают двух типов: лентецов и цепней. У лентенов они напоминают яйца трематод (овальные с крышечкой). Яйца цепней резко отличаются по строению от яиц гельминтов других классов: они чаще средней величины, округлой формы, серого цвета, зрелые (внутри зародыш - онкосфера с тремя парами эмбриональных крючьев).
Яйца нематод. Отличаются от яиц трематод отсутствием крышечки; от яиц цестод - отсутствием онкосферы.
Размеры, форма, строение и цвет оболочек яиц нематод очень разнообразны. Наружная оболочка бывает гладкой, бугристой, ячеистой: толщина оболочек варьирует от тонкой (у стронгилят) до толстой (у трихоцефал). У большинства нематод яйца овальной формы, симметричные, у некоторых - получилиндрические (у драшей). Большинство нематод выделяют наружу незрелые яйца на предсегментационной стадии или нескольких шаров дробления, меньшинство - зрелые (внутри яйца сформирована личинка).
Яйца скребней. Они имеют овальную, эллипсоидную и веретенообразную формы: размер их от среднего до крупного. Выделяемые во внешнюю среду яйца содержат внутри личинку - акантор с десятью эмбриональными крючьями (зрелые).
Клинические наблюдения
Эпизоотологические данные
При диагностике многих гельминтозов сельскохозяйственных животных значительную помощь оказывают эпизоотологические данные (неблагополучие хозяйства по конкретным болезням, сезон года, возраст больных животных, характер пастбищ и водоисточников, метеорологические условия и др.). Например, массовое заболевание с признаками брюшных водянок и падеж овец осенью после дождливого лета и использование под выпасы заболоченных участков пастбищ дает основание заподозрить острую форму фасциолеза. Заболевание гусят летом с признаками расстройства пищеварения (поносы) и нервной системы (парезы) после выпаса их на мелком стоячем водоеме, обильно заселенном циклопами, является основанием для установления предполо-жительного диагноза на дрепанидотениоз. Падеж ягнят весной (через 3-4 недели после начала пастбищного содержания) должен вызвать подозрение о заболевании молодняка овец мониезиозом. Необходимо также учитывать зональные особенности гельминтозов домашних животных, желательно в комплексе с клиническими наблюдениями.
Глава III. Диагностика гельминтозов и методы гельминтологических исследований
Необходимо обследовать на гельминтозы всех больных, обращающихся за медицинской помощью, и особенно больных, обращающихся к педиатру, терапевту и невропатологу с жалобами на явления со стороны желудочно-кишечного тракта, нервной системы и с анемией. Если врач не всегда может применить лабораторные методы исследования, то опросить больного о выделении у него гельминтов обязан каждый медицинский работник, оказывающий помощь в амбулатории или стационаре.
При наличии приведенных в соответствующих главах клинических показаний следует уточнить диагноз при помощи лабораторных методов исследования на гельминтозы.
В связи с преобладанием кишечных гельминтозов наибольшее практическое значение имеет исследование испражнений.
Методы исследования испражнений на гельминтозы
Испражнения доставляются в лабораторию в чистой стеклянной посуде (около четверти стакана испражнений, взятых из разных мест одной порции); при плановом обследовании допускается доставка испражнений в лабораторию в спичечных или лубочных коробочках.
Для контроля дегельминтизации доставляется (по назначению врача) вся порция испражнений, собранная после приема противоглистного средства и слабительного (в больших закрытых стеклянных банках, ведрах).
Микроскопическое исследование испражнений является основным при диагностике кишечных гельминтозов; ему всегда должен предшествовать общий макроскопический осмотр фекалий для обнаружения члеников крупных цестод, остриц, аскарид и др.
Испражнения должны быть свежими или консервированными (в 5% растворе формалина), так как высыхание резко изменяет структуру яиц. Кроме того, при стоянии фекалий происходит быстрое развитие яиц некоторых гельминтов (например, анкилостом), что затрудняет диагностику.
Согласно инструкции Министерства здравоохранения СССР, необходимо исследовать испражнения одновременно по методу Фюллеборна и нативного мазка.
Нативный мазок
Нативный мазок: небольшой кусочек фекалий (с горошину), взятый спичкой, стеклянной или деревянной палочкой из разных мест доставленной порции, тщательно растирают на предметном стекле в капле 50% раствора глицерина или в физиологическом растворе, или в воде. Накрывают покровным стеклом, слегка надавливая последнее (препаровальной иглой). Мазок должен быть тонким, прозрачным и равномерным. Он применяется лишь как дополнение к другим методам, дающим обогащение препарата. Просматривать следует не менее двух препаратов.
С целью обнаружения личинок гельминтов (а также яиц их) нативный мазок делается следующим образом (по Шульману): 2-3 г фекалий тщательно размешивают «закручиванием» стеклянной палочкой в эмульсию с пятикратным количеством чистой воды или физиологического раствора. Во время размешивания личинки скопляются у стеклянной палочки, поэтому тотчас после окончания размешивания каплю эмульсии быстро переносят стеклянной палочкой на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют. С. Д. Любченко (1936) доказала, что метод закручивания является более эффективным, чем метод мазка, особенно в отношении яиц аскарид. На основании работы С. Д. Любченко мы считаем целесообразным заменить метод мазка методом закручивания.
Метод Фюллеборна
Метод Фюллеборна: 5-10 г фекалий, взятых из разных мест, помещают в баночку емкостью в 50-100 мл и тщательно растирают стеклянной или деревянной палочкой в насыщенном растворе поваренной соли (400 г этой соли растворяют в 1 л воды, нагревают до кипения и фильтруют через слой ваты или марли; раствор употребляется холодный: удельный вес 1,2). Раствор приливают постепенно, пока не получится равномерная суспензия, причем общее количество приливаемого раствора должно быть приблизительно в 20 раз больше количества фекалий. Для перемешивания фекалий Фюллеборн рекомендовал употреблять чайные стаканы, но удобнее готовить суспензию в баночках для мази емкостью в 50-100 мл, используя по две баночки на каждый анализ (или в стаканчиках емкостью в 100 мл).
Тотчас после приготовления суспензии с поверхности ее удаляют шпателем, металлическим совочком или кусочком чистой бумаги всплывшие на поверхность крупные частицы (растительные образования, непереваренные остатки пищи и пр), после чего смесь оставляют стоять на 1-1,5 часа. По истечении этого времени с поверхности смеси снимают всю пленку прикосновением проволочной или платиновой петли (плашмя) диаметром не больше 1 см, согнутой под прямым углом; пленку стряхивают на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. Под каждое покровное стекло (18х18 мм) помещают 3-4 капли. Всего следует приготовить не менее 4 препаратов (на каждый препарат - одно покровное стекло). Петлю прокаливают на огне и промывают водой после каждого анализа.
По методу Фюллеборна быстро и легко обнаруживаются яйца всех нематод (за исключением неоплодотворенных яиц аскарид) и яйца карликового цепня.
Метод Бермана применяется для исследования испражнений на личинки гельминтов (при стронгилоидозе). Этот метод заключается в следующем: 5 г фекалий на металлической сетке (для этих целей удобна цедилка для молока) помещают на стеклянную воронку, прикрепленную к штативу. На нижний конец воронки надевают резиновую трубку с зажимом.
Сетку с калом приподнимают и в воронку наливают нагретую приблизительно до 50° воду таким образом, чтобы нижняя часть сетки с калом была погружена в воду. Личинки активно переходят в воду и скопляются в нижней части резиновой трубки. Через 2-4 часа открывают зажим и жидкость спускают в одну или две центрифужные пробирки.
После центрифугирования в течение 1-2 минут верхнюю часть жидкости быстро сливают, а осадок наносят каплями на предметные стекла и исследуют под покровными стеклами или распределяют тонким слоем на 2-3 больших стекла и тогда исследуют без покровных стекол.
Метод Бермана применяется также и для исследования почвы на наличие личинок анкилостом.
Метод Столла
Метод Столла применяется для определения интенсивности инвазии. В специальную стеклянную колбочку наливают децинормальный раствор едкого натра до метки 56 см 3 , а затем прибавляют испражнения до тех на пор, пока уровень жидкости не достигнет 60 см 3 , т. е. 4 см 3 . После взбалтывания со стеклянными бусами берут для исследования 0,075 мл смеси и исследуют под одним-двумя обычными покровными стеклами. Полученную сумму умножают на 200, чтобы получить количество яиц, содержащихся в 1 см 3 испражнений.
Исследование дуоденального содержимого
Дуоденальный сок и пузырную желчь, полученные обычным путем при помощи зондирования (а пузырную желчь и после рефлекса с желчного пузыря), тщательно смешивают с равным объемом этилового эфира; смесь центрифугируют, после чего осадок исследуют под микроскопом. Помимо осадка, микроскопическому исследованию обязательно подвергаются плавающие в жидкости хлопья, в которых могут находиться яйца гельминтов. При исследование на яйца гельминтов желудочного сока и рвотных масс можно пользоваться этой же методикой.
Исследование дуоденального сока и содержимого желудка необходимо производить при подозрении на глистные заболевания печени, желчного пузыря (описторхоз, фасциолез, дикроцелиоз) и двенадцатиперстной кишки (стронгилоидоз).
Исследование мокроты
Мокроту растирают по стеклянной пластинке, плотно накрывают другой стеклянной пластинкой и рассматривают невооруженным глазом на светлом и черном фоне, а также под лупой при проходящем свете. Отдельные кусочки мокроты («ржавые» скопления, обрывки тканей и пр.) наносят тонким слоем на предметное стекло, плотно накрывают его покровным и исследуют при малом и большом увеличении микроскопа.
а) Для диагносцирования цистицеркоза кожи, подкожной клетчатки или мышц, асептически вырезанный кусочек соответствующей ткани исследуют сначала не вооруженным глазом. Участки тканей раздвигают при помощи препаровальных игл с целью обнаружения видимого простым глазом пузырька - цистицерка (фото А); длина его 6-20 мм, ширина 5-10 мм. При обнаружении пузырька, подозрительного на цистицерк, он раздавливается между двумя предметными стеклами и рассматривается под микроскопом. Цистицерк (Cistycercus cellulosae) определяется по наличию сколекса с четырьмя присосками и венчиком крючьев (фото Б).
| Фото. А — цистицерки с вывернутыми наружу сколексами; Б — Головка свинного цепня. | |
 |
 |
б) Для диагносцирования трихинеллеза асептически вырезанный кусочек мышцы (двуглавой или икроножной) тщательно измельчают в 50% растворе глицерина на тончайшие волоконца с помощью препаровальных игл. Измельченные мышцы сдавливаются между двумя предметными стеклами и исследуются при малом увеличении микроскопа в затемненном поле зрения. Исследование мышц на трихинеллез рекомендуется производить не ранее чем на 8-й день заболевания. Личинки трихинелл находятся в мышцах в свернутом спиралью положении: они заключены в лимонообразные капсулы.
| Фото. А —Личинки трихинелл в мышцах; Б — Обызвествленные капсулы трихинелл. | |
 |
 |
Рентгеноскопия
Наиболее часто рентгеноскопия применяется для диагносцирования эхинококкоза и реже - цистицеркоза. Цистицерки обнаруживаются при рентгеноскопии только после обызвествления (в случаях длительного заболевания). За последние годы рентгеноскопия применяется и для диагносцирования аскаридоза как в ранней личиночной стадии, так отчасти и в кишечной стадии.
В период миграции личинок аскарид (и анкилостомид) в легких выявляются нестойкие, иногда множественные воспалительные очаги; одновременно в крови появляется значительная эозинофилия.
Половозрелые аскариды хорошо видны при рентгеноскопии кишечника пораженных лиц. Этот метод, несмотря на его сложность и громоздкость, должен быть использован как дополнительный для диагностики аскаридоза в случаях с отрицательным копрологическим анализом. По данным Е. С. Геселевич, из 180 больных аскаридозом, выявленных при рентгеноскопии, у 54 в кале не было обнаружено яиц аскарид (смотри ).
Чаще всего заражение гельминтами происходит через зараженную пищу, воду, а также через немытые руки.
Прямые и косвенные методы диагностики гельминтозов
На сегодняшний день разработано множество методов диагностики гельминтозов, однако всех их можно разделить на две большие группы: прямые и косвенные. К прямым методам диагностики относятся те исследования, которые позволяют непосредственно выявить гельминты, их фрагменты, личинки или яйца. Косвенные методы диагностики гельминтозов основываются на выявлении вторичных изменений, характерных для той или иной разновидности гельминтоза.
Самыми популярными прямыми методами диагностики гельминтозов являются макро- и микрогельминтоскопические методы исследований.
Макрогельминтоскопические методы исследования
Вопросы читателей
18 October 2013, 17:25 Добрый день. Уже около почти год ощущаю зуд вокруг анального отверстия. Никаких болевых ощущений. Подскажите к кому обратится и что это может быть? Спасибо
Задать вопросМикрогельминтоскопические методы исследования
Иммунологические методы исследования
Диагностики гельминтозов основаны на обнаружении в сыворотке крови специфических антител к тем или иным гельминтам. Для иммунологического исследования применяется метод непрямой гемагглютинации, иммуноферментного анализа, иммуноэлектрофореза, иммуноабсорбции и другие серологические методы исследований крови.
Иммунологические методы исследования применяются для диагностики альвеококкоза, эхинококкоза, цистицеркоза, аскаридоза, шистосомоза и других гельминтозов.
Анализ желчи и дуоденального содержимого
Биопсия
Электропунктурная диагностика
Электропунктурная диагностика основана на анализе сопротивления кожи при раздражении ее слабым электрическим током. Электропунктурная диагностика при подозрении на гельминтоз может проводиться двумя способами: по методу Фолля или с помощью резонансного тестирования.
Инструментальные методы исследования
При гельминтозах также проводится ультразвуковое исследование, ФЭДГС, и компьютерная диагностика. Эти методы позволяют определить степень вреда, нанесенного гельминтами, а также определить состояние отдельных органов.
